一步法Caspase 1 活性炎症小体检测试剂盒

产品简介：

Caspase（Cysteine-requiring Aspartate Protease）称为含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶，是一类存在于细胞质中的蛋白酶。Caspase家族成员在程序性细胞死亡和炎症中起重要作用。Caspase 1是细胞焦亡启动过程中的关键酶，Caspase 1能剪切产生具有活性形式的促炎细胞因子白细胞介素1ß (IL-1ß)和IL-18。细胞焦亡启动后，激活后的Caspase 1可以剪切YVAD肽段序列，因此本试剂盒采用Ac-YVAD-AFC作为检测底物。试剂盒的检测原理是Caspase 1可以催化底物Ac-YVAD-AFC释放出荧光分子AFC（7-氨基-4-三氟甲基香豆素），从而可以通过荧光分析方法（E_x = 400 nm; E_m = 505 nm）检测Caspase 1的活性。

Caspase 1的荧光检测原理 

ABroadKit^TM 一步法炎症小体检测（Caspase 1活性）试剂盒操作简便：仅需一步，半个小时内就可以检测细胞炎症小体的激活状态，适用于细胞焦亡状态的高通量筛选。试剂盒可以用于检测96孔或384孔培养的贴壁细胞或悬浮细胞中Caspase 1酶活性。将配制好的试剂直接加入到细胞孔中，细胞板振荡器操作1分钟，酶标仪实时或者终点法检测荧光信号从而观察Caspase 1活性。

使用方法：

1, 试剂准备：根据96孔板中待测样本数目，按照每孔100 mL量取反应液（试剂A）。按照1:100倍稀释量向反应液中加入底物（试剂B）。按照1:100倍稀释量向反应液中加入添加剂（试剂C）。混匀后避光置于冰浴备用。

2, 优选不透明框/透明平底或者全不透明的96孔细胞板，这类细胞板可以防止不同孔荧光信号互相干扰。但是常规的透明96孔细胞培养板也可以用于本试剂盒。以96孔板为例，为了达到较好的试验效果，建议每孔细胞数在50000个左右（细胞覆盖率70%以上），提前处理细胞使其进入细胞焦亡状态。向培养细胞的培养基中，每孔加入100 mL上述配制好的试剂。细胞板振荡仪，500 rmp速率振荡1分钟。注意不要采用移液枪手动进行混匀，这一操作会产生大量气泡影响检测的准确性。

3，细胞焦亡检测，即Caspase 1活性检测：设定酶标仪为37^oC，设置荧光分光光度计E_x = 400 nm; E_m = 505 nm。可以采用动力学方法检测，每1分钟测定一次体系的荧光值，共测定10-30分钟，或者采用终点法检测，37oC孵育10-30分钟，检测体系的荧光值。

注意事项：

1，  试剂盒储存于-20 ℃避光保存，一年内有效。解冻后可分装保存于-20 ℃，避免反复冻融。

2，  一般情况下，1-2分钟内试剂盒即可完全裂解细胞且效果良好，可以在光学显微镜下确认细胞裂解状态。可以适当增加振荡时间至5分钟有利于检测。

3，  实验操作时如果在96孔中产生气泡，会影响荧光检测的准确性。如果个别孔存在气泡，可以通过细胞板离心或者枪头吸取液体去除气泡后再将注回板孔中。4，  如果没有观察到荧光强度的变化或者变化强度小，可能是细胞焦亡诱导不充分造成的。

5，  商业蛋白水解酶抑制剂cocktail一般含有Cys蛋白水解酶抑制剂，有可能会抑制Caspase 1活性。

6，  本产品仅用于专业人员的科学研究，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

包装清单：